这个问题我之前处理过，核心原因是IIS Express默认会让虚拟目录继承主站点的.NET相关配置——哪怕你的虚拟目录web.config里没引用任何程序集，它还是会往上读取主站点的web.config，尝试加载主站点bin目录里的程序集，而虚拟目录本身没有这些文件，所以触发500错误。

下面是几个针对性的解决办法，你可以根据自己的场景选择：

方法1：阻止主站点配置被虚拟目录继承 #

直接在主站点的web.config里，把需要加载程序集的配置节点（比如<compilation>、<runtime>）包裹在<location>标签中，设置inheritInChildApplications="false"，这样虚拟目录就不会继承这些配置了。

示例代码：

<!-- 主站点web.config -->
<configuration>
  <!-- 其他全局配置 -->
  
  <location path="." inheritInChildApplications="false">
    <system.web>
      <compilation debug="true" targetFramework="4.7.2">
        <!-- 主站点的程序集引用、编译设置等 -->
      </compilation>
    </system.web>
    <runtime>
      <!-- 主站点的程序集绑定、版本控制等 -->
    </runtime>
  </location>
</configuration>

这个方法的好处是一劳永逸，虚拟目录完全不会继承主站点的.NET相关配置，适合虚拟目录只提供静态内容的场景。

方法2：在虚拟目录web.config中清除继承的程序集引用 #

如果不想修改主站点配置，可以在虚拟目录的web.config里，明确清除所有继承来的程序集引用，避免IIS尝试加载不存在的文件。

示例代码：

<!-- 虚拟目录web.config -->
<configuration>
  <system.web>
    <compilation>
      <assemblies>
        <clear /> <!-- 清除所有继承的程序集引用 -->
      </assemblies>
    </compilation>
  </system.web>
  
  <!-- 如果主站点有runtime程序集绑定，也可以清除 -->
  <runtime>
    <assemblyBinding xmlns="urn:schemas-microsoft-com:asm.v1">
      <dependentAssembly>
        <clear />
      </dependentAssembly>
    </assemblyBinding>
  </runtime>
</configuration>

这个方法更灵活，适合虚拟目录需要继承部分主站点配置，但要排除程序集加载的情况。

方法3：将虚拟目录配置为纯静态内容应用 #

如果你的虚拟目录完全只提供静态文件（比如图片、CSS、JS），可以直接在IIS Express的applicationhost.config文件里，把虚拟目录设置为一个独立的应用程序，并指定一个不加载.NET程序集的应用程序池。

步骤：

1. 找到IIS Express的applicationhost.config文件，通常在%USERPROFILE%\Documents\IISExpress\config目录下。
2. 找到你的站点配置节点，把虚拟目录拆分为独立的<application>节点，设置applicationPool为一个无.NET运行时的池（或者新建一个）。

示例配置：

<site name="YourMainSite" id="1">
  <!-- 主站点应用 -->
  <application path="/" applicationPool="Clr4IntegratedAppPool">
    <virtualDirectory path="/" physicalPath="C:\Path\To\MainSite" />
  </application>
  
  <!-- 虚拟目录作为独立应用，使用无.NET的池 -->
  <application path="/SharedStatic" applicationPool="StaticContentPool">
    <virtualDirectory path="/" physicalPath="C:\Path\To\SharedStaticFiles" />
  </application>
</site>

<!-- 新建一个无.NET运行时的应用程序池 -->
<applicationPools>
  <add name="StaticContentPool" managedRuntimeVersion="" managedPipelineMode="Classic" />
</applicationPools>

设置managedRuntimeVersion=""后，这个应用池不会加载任何.NET程序集，彻底解决问题。

内容的提问来源于stack exchange，提问作者Dani