你遇到的核心问题是：单文件打包后，PyInstaller会将所有资源解压到系统临时目录（比如%temp%下的_MEIPASSxxxxxx文件夹），而你的代码里用的固定路径或相对路径无法定位到这个临时目录，导致程序依赖外部文件。下面是完整的解决方案：

步骤1：修改代码，动态获取资源路径 #

我们需要一个函数来判断程序是否处于打包后的运行环境，自动切换资源路径。修改你的测试代码如下：

import sys
import os
from tkinter import *

def resource_path(relative_path):
    """获取资源文件的绝对路径，兼容开发环境和打包后环境"""
    try:
        # 打包后，PyInstaller会设置这个变量指向临时解压目录
        base_path = sys._MEIPASS
    except Exception:
        # 开发环境下，使用当前脚本所在目录
        base_path = os.path.abspath(".")
    return os.path.join(base_path, relative_path)

root=Tk()
# 设置窗口大小
root.resizable(width=False, height=False)
root.geometry("925x722")
# 设置标题
root.title("SOFT1")
# Frame 1
f1=Frame(root, width=345,height=475,bg="light grey",highlightbackground="black",highlightthickness=4)
f1.place(x=20,y=235)
# 设置背景图（使用动态路径）
Logo=PhotoImage(file=resource_path("PNG_File.png"))
lab6=Label(root, image=Logo)
lab6.place(x=0, y=0)
# 设置窗口图标（使用动态路径）
root.iconbitmap(resource_path("ICO_File.ico"))
mainloop()

步骤2：使用PyInstaller命令打包 #

在命令行中运行以下命令（确保你的Python环境已安装PyInstaller：pip install pyinstaller）：

pyinstaller --onefile --windowed --add-data "PNG_File.png;." --add-data "ICO_File.ico;." your_script_name.py

参数说明： #

• --onefile：生成单文件EXE
• --windowed：隐藏控制台窗口（适合GUI程序）
• --add-data "源文件;目标路径"：将指定资源打包进EXE，解压后放到目标路径（这里.表示临时目录的根目录，和EXE在同一临时上下文）

步骤3：测试打包后的EXE #

打包完成后，dist目录下会生成你的EXE文件。将这个EXE单独复制到其他电脑上运行，不需要携带PNG和ICO文件，程序应该能正常显示背景图和窗口图标。

关键注意事项 #

• 确保PyInstaller版本与Python3.7兼容：推荐使用PyInstaller 4.5.1或更高版本（可通过pip install pyinstaller==4.5.1指定版本）
• 如果窗口图标仍然不显示，检查ICO文件是否为标准Windows ICO格式（避免使用非标准尺寸或格式的ICO）

内容的提问来源于stack exchange，提问作者TheKraken