将MP4文件的荧光信号强度标度至相机原始采集计数

可以通过校准系数法近似还原原始相机采集的计数，但前提是要先做一次简单的校准实验，具体步骤如下：

• 准备校准样本
  用同一组荧光数据，同时导出两份文件：一份是相机原始格式的计数文件（比如TIFF、RAW或相机自带的原始输出格式），另一份是你平时用的参数导出的MP4文件。

• 计算校准系数
  挑选几个信号有代表性的区域（比如低、中、高亮度区域），分别提取原始文件的计数数值和MP4对应区域的像素值。用「原始计数 ÷ MP4像素值」算出每个区域的系数，取这些系数的平均值，就是你需要的校正系数。

  注意：如果你的MP4导出时应用了伽马校正（常见γ=2.2），得先把MP4的像素值做伽马反转，公式为校正后MP4值 = MP4像素值^(1/2.2)，再用这个值来计算系数。

• 批量校正MP4数据
  后续所有同参数导出的MP4文件，只需将像素值乘以这个校准系数，就能近似得到原始相机的采集计数。

关键注意事项 #

• 导出MP4的参数（编码格式、码率、伽马设置、色域等）必须固定，一旦修改参数，就得重新做校准，否则系数会失效。
• 这种方法是近似还原，因为MP4的有损压缩会丢失部分细节（尤其是暗部噪点和高光饱和区域的信号），如果实验对精度要求极高，优先保存原始格式文件而非MP4。

内容的提问来源于stack exchange，提问作者M. Ochoa