嗨，James！这个问题我之前也碰到过，本质是PyInstaller单文件打包后的路径机制导致的，我给你一步步讲清楚怎么解决：

问题根源 #

当你用pyinstaller --onefile打包时，生成的可执行文件运行时会先把自己解压到系统临时目录（比如/tmp/_MEIxxxxxx这类随机命名的文件夹），然后在临时目录里执行代码。这时候你的load_dotenv()默认会在临时目录找.env文件，而不是你放置可执行文件的实际目录，所以才会读不到变量返回None。

解决方法：修改代码明确指定.env路径 #

你需要在代码里先获取当前可执行文件的实际存放目录，再拼接同目录下的.env文件路径，这样不管可执行文件被放到哪里运行，都能精准找到同目录的.env。修改后的代码如下：

import os
import sys
from dotenv import load_dotenv

# 获取可执行文件/脚本的所在目录
def get_current_dir():
    # 如果是打包后的可执行文件
    if getattr(sys, 'frozen', False):
        return os.path.dirname(sys.executable)
    # 如果是开发环境下的脚本
    else:
        return os.path.dirname(os.path.abspath(__file__))

# 拼接同目录下的.env文件路径
env_file_path = os.path.join(get_current_dir(), '.env')
load_dotenv(dotenv_path=env_file_path)

test_environment_variable = os.environ.get("TEST_ENVIRONMENT_VARIABLE")
print(test_environment_variable)

验证步骤 #

1. 用修改后的代码重新打包：pyinstaller --onefile main.py
2. 把生成的可执行文件和你的.env文件放在同一个目录下
3. 运行可执行文件，现在应该能正确读取.env里的变量了
4. 修改.env内容并保存后重新运行，输出会同步更新为新的变量值

额外小提示 #

• .env文件的规范写法是变量名和值之间不要加空格，值也不需要引号，比如TEST_ENVIRONMENT_VARIABLE=This is a new test environment variable（当然你原来带空格和引号的写法也能被读取，但规范写法更不容易出问题）
• 如果要把可执行文件分发给其他人，可以同时附带一个.env.example模板文件，让用户复制并重命名为.env后再修改内容

这样处理后，你的可执行文件就能稳定读取同目录下的可编辑.env文件啦！

备注：内容来源于stack exchange，提问作者user60707